ИГХ маркеры в ветеринарии

11 декабря, 2020CYTOVET

Иммуногистохимия (ИГХ) — метод исследования тканей с целью выявления белков с помощью специфической реакции антиген-антитело. Антиген находится в тканях, а антитело, снабжённое определённой меткой, вводится в процессе исследования. Такие антитела называют маркерами, и ниже мы рассмотрим, какие иммуногистохимические маркеры обычно применяются в ветеринарии.

Типы антител

Антитела, используемые для специфического обнаружения, могут быть поликлональными или моноклональными.

Поликлональные антитела получают инъекцией животным интересующего белка или пептидного фрагмента и после стимуляции вторичного иммунного ответа выделяют антитела из цельной сыворотки. Таким образом, поликлональные антитела представляют собой гетерогенную смесь антител, которые распознают несколько эпитопов.

Моноклональные антитела получают путем инъекции животному, а затем взятия определенного образца иммунной ткани, выделения родительской клетки и использования полученной иммортализованной линии для создания антител. Это заставляет антитела проявлять специфичность к одному эпитопу.

В зависимости от метки-красителя антитела могут быть ядерными или цитоплазматическими.

ИГХ маркеры в ветеринарии (на примере тканей почки).

Узнать стоимость ИГХ

Классификация маркеров

Прежде всего обращаем ваше внимание, что представленная ниже классификация является условной и используется, в первую очередь, для удобства врачей, которые обращаются к нам за помощью. За основу взяты типы тканей, из которых может развиваться опухоль, реагирующая на то или иное антитело.

Эпителиальные маркеры

Основная масса эпителиальных маркеров представлена цитокератинами (CK), поскольку они входят в состав цитоскелета эпителиальных клеток.

Цитокератины используются в иммуногистохимии для идентификации карцином и реже некоторых видов сарком.

Ниже представлены основные эпителиальные маркеры, которые используются в практике CYTOVET.

CK1 — применяется для обнаружения плоскоклеточной карциномы, сосудистых опухолей, ангиосаркомы (73%), эпителиоидной гемангиоэндотелиомы (100%), эпителиоидной саркомы (70%), гемангиомы (часто), шванномы (62%);
CK5/6 — позволяет отличить эпителиоидную мезотелиому (++) от карциномы легкого (—), рак молочной железы от карциномы потовых желез, выявить базальные/миоэпителиальные клетки молочной железы, базальные клетки простаты в моче (предвестники СА), обнаружить недифференцированную синоназальную карциному;
CK7 — позволяет идентифицировать первичные слизистые опухоли яичника, плоскоклеточный рак шейки матки, аденокарциному эндометрия, почечно-клеточный рак, уротелиальную карциному (30%), карциномы слюнных желез (93%), семиномы и эмбриональные карциномы;
CK8 — используется, чтобы подтвердить эпителиальную природу ткани/опухоли, а также для оценки сторожевых лимфатических узлов при раке толстой кишки;
CK17 — позволяет диагностировать уротелиальную гиперплазию, идентифицировать эпителий сально-потовых желез и миоэпителиалиомы молочной железы;
CK18 — используется в обязательном порядке при подозрении на венерическую саркому у собак, обнаруживает эпителий рака молочной железы (потеря экспрессии при раке молочной железы является плохим прогностическим фактор) и карциномы мочевого пузыря (ухудшает прогноз), совместно с CK19 позволяет делать прогноз неаллергической астмы, применяется для оценки сигнальных лимфатических узлов при карциноме кишки и лимфатических узлов карциномы желудка, является маркером апоптоза;
CK20 — позволяет идентифицировать первичные слизистые опухоли яичника (74%), карциномы желчного протока и пузыря, производить совместную оценку поджелудочной железы, неопухолевый бронхиолоальвеолярный скриннинг, совместно с CK7 даёт отрицательный результат при карциномах коры надпочечников и предстательной железы, применяется в cell-block мочи при уротелиальной карциноме;
AE1/AE3 (PCK) — коктейльный маркер, который содержит в себе смесь цитокератинов: CK1-8, 10, 14-16 и 19. Позволяет идентифицировать подавляющее большинство эпителиальных опухолей и тканей, в том числе, опухоли молочной железы, кожи, элементы гиперплазии.

Мезенхимальные маркеры

Мезенхимальные маркеры используются для идентификации таких опухолей, как фибросаркома, остеосаркома, опухоли нервных тканей. Кроме того, эти маркеры можно использовать для определения патологических тканей неопухолевого происхождения. Как правило, используются в сочетании с маркерами эпителиальных тканей.

CD34 — позволяет обнаружить сосудистую инвазия опухолей (CD34 +), применяется при смешанной тимоме, гемангиоперицитоме;
Desmin — подтверждает миогенное происхождение ткани/опухоли, позволяет дифференцировать гладкомышечные опухоли от гистиоцитарных;
Neuron specific enolase (NSE) — представляет собой цитоплазматический фермент, преимущественно, обнаруживаемый в нейронах и нейроэндокринных клетках, экспрессируемый, позволяет диагностировать плохо дифференцированные нейроэндокринные опухоли, часто не специфичен;
S100 — является маркером шванновских клеток, вследствие чего позволяет провести дифференцировку: 1) между шванномой (окрашивает все клетки) и нейрофибромой (смесь положительных и отрицательных клеток), 2) между доброкачественными опухолями оболочки нерва (S100 сильные и диффузные) от злокачественных опухолей оболочки периферического нерва (обычно слабые или отрицательные S100), также используется в диагностике ряда миоэпителиальных опухолей и меланом;
SMA— определяет клетки гладких мышц и миофибробласты в нормальной, реактивной или опухолевой ткани (лейомиома\лейомиосаркома, амелобластомы, ХОБЛ у лошадей, при некоторых патологиях слюнных желез, опухоли протока и сиаладените);
Vimentin — подтверждает способность ткани к окрашиванию, способен подтвердить мезенхимальное происхождение, но многочисленные неспецифичные окраски в других тканях, применяется для диагностики опухоли Лейдига, патологии семенного канатика, фиброзной опухоли в почке, синовиальной саркомы.

Маркеры метастазов

Данная группа маркеров используется для идентификации меланогенных и лимфогенных белков. Сюда же мы отнесём группу вторичных и специфичных маркеров, которые могут дать дополнительную информацию о процессах, проходящих в тканях, например, для прогнозов развития опухолей.

Меланогенные маркеры

HMB45 — общий маркер для подтверждения меланомы (инвазивные меланомы с парадоксальным созреванием показывают, по крайней мере, очаговую глубокую реактивность HMB45, в отличие от невусов, которые являются отрицательными в глубокой дерме), применяется для оценки сторожевых лимфатических узлов при меланоме и диагностики периваскулярных опухолей эпителиоидных клеток (PEComa);
Melan-A — специфичный маркер линии меланоцитов, более чувствительный, чем HMB45, применяется для диагностики первичных меланом, ангиомиолипом, PEComa, положительный при опухолях коры надпочечников и стромальных опухолях полового шнура, отрицательный — в нейрофиброме, позволяет отличить корковые опухоли надпочечников от почечно-клеточного рака;
MUM1 — позволяет идентифицировать диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому, ходжкиноподобную лимфому, меланоцитарные опухоли;
S100 — см. выше.

Лимфоидные/миеломные маркеры

BCL2 — позволяет диагностировать лимфомы, MALT-лимфомы, реже — аденома коры надпочечников и карциномы, некоторые опухоли сердца, базальноклеточный рак, доброкачественные опухоли молочной железы, метаплазию шейки матки, рак почки, аденомы/карциномы толстой кишки, дерматофибросаркомы, некоторые ангиосаркомы, плоскоклеточные раки;
CD3 — специфическое Т-клеточное антитело; обычно применяется для выявления Т-клеток при доброкачественных и злокачественных заболеваниях лимфоидной ткани, вместе с маркером CD20 часто используется при первоначальной цитологической оценке патологии лимфоидной ткани;
CD20 — позволяет обнаружить 90% В-клеточных лимфом, тимомы, также используется при некоторых миеломах, но поставляемые в Россию наборы, к сожаление, плохо работают на животных, поэтому в настоящее время этот маркер в CYTOVET почти не используется;
CD45 — применяется при большинстве лимфом без верификации на В- и Т-клеточные, кроме того позволяет диагностировать гистиоцитарную саркому, плазмоцитомы, лимфогенные выпоты, около 30% дрожжей Candida albicans, редко может сработать на карциномы недифференцированные/нейроэндокринные, опухолевый некроз;
PAX5 — используется для обнаружения предшественников В-клеток, диагностики клеток Рида-Штернберга, лимфоплазмацитарной лимфомы.

Специфичные маркеры

CD117 — позволяет диагностировать лейкозы, ангиосаркому (50%), дифференцировать группы сарком (рабдомиосаркома, остеосаркома, хондросаркома, постинъекционная саркома, синовиальная саркома), желудочно-кишечную стромальную опухоль, мастоцитомы, меланому, ряд почечных аденокарцином, семиномы, карциномы слюнных желез (сильное окрашивание), можно использовать при исследованиях бесплодия;
Inhibin A — выявляет клетки Сертоли, гранулезные клетки, специфичен для предстательной железы, мозга, надпочечников;
Ki67 — является высокочувствительным ядерным маркером клеточной пролиферации, часто применяется совместно с CD117 для оценки патсостояния, стадийности, прогностических факторов и GRADE;
Uroplakin — позволяет обнаружить опухолевые уротелиальные поражения, опухоли яичника.

Метки: иммуногистохимия