Гистологическое исследование глаз животных

Строение глаза

Строение глазного яблока и слои сетчатки глаза (кликните для увеличения)

Гистология глаз животных — многоэтапный и трудоёмкий процесс, включающий в себя забор материала, его фиксацию, обезвоживание, заливку в парафин, изготовление срезов, окрашивание и, собственно, исследование полученных срезов.

В России единицы занимаются подобным исследованием, однако, несмотря на его сложность, есть ряд случаев, при которых это патоморфологическое исследование незаменимо. Например, в офтальмоонкологии гистология тканей глаза позволяет точно установить вид опухоли, степень её прорастания в окружающие ткани, наличие метастазов и полноту иссечения после хирургического вмешательства.

Кабинет клинической цитологии и компьютерной цитометрии CYTOVET предлагает ветеринарным врачам, столкнувшимся в своей практике с необходимостью гистологии тканей глаз собак, кошек или других животных, свои услуги в проведении данного исследования. Мы следим за современными тенденциями развития данной методики, перенимаем опыт зарубежных коллег и гарантируем качество проведённого исследования. Для уточнения деталей позвоните по телефону 8-921-942-04-00.

Обратите внимание, что по просьбе врачей, которые отправляют глаза на исследование в CYTOVET, мы сделали отдельный бланк направления.

Направление на исследование глаза в CYTOVET

Ниже мы последовательно остановимся на некоторых этапах, чтобы наглядно показать, как проводится гистологическое исследование глаз в нашем кабинете, а также дадим несколько рекомендаций по забору и отправке материала.

Забор материала

Забор материала на гистологию тканей глаза осуществляется путём энуклеации глазного яблока. Эту манипуляцию следует производить аккуратно, чтобы предотвратить отслоение сетчатки и появление всевозможных артефактов в препарате.

Обратите внимание, что удалять глазное яблоко нужно, как можно ближе к стенке орбиты, чтобы в материале присутствовал участок зрительного нерва.

Это нужно для последующего получения срезов с поперечными сечениями зрительного нерва. Нужен участок длиной всего несколько миллиметров, но пренебрежение этим моментом приводит к артефактам или полной невозможности оценить состояние зрительного нерва.

Образцы глаз животных

Образцы глаз животных после энуклеации.

Лишние ткани вокруг глазного яблока надо удалить (включая гардерову железу у грызунов). Это облегчит обзор и препарирование материала, а также предотвратит возможное отслоение сетчатки.

Мы рекомендуем сохранять фрагменты мышечных волокон, чтобы была возможность ориентироваться, где какая сторона, и отличить левое глазное яблоко от правого.

Маркировать глазные яблоки также можно с помощью татуировочных чернил, несмываемой краски, швов и другими доступными способами.

Фиксация глазного яблока

Фиксацию нужно начинать как можно раньше после энуклеации/смерти, что позволит минимизировать аутолиз. Наличие в материале внутриглазных образований, крови, а также большие глазные яблоки, например, у лошадей, требуют более длительной фиксации.

Если взятие материала производилось вне лаборатории, то следует поместить глазные яблоки в формалин и в течение 24 часов доставить на исследование.

На 1 часть объёма глазного яблока нужно 10 частей фиксатора. Использование марли позволяет произвести полную фиксацию на 360 градусов. Нет необходимости в периодических обливаниях материала, поскольку это может привести к противоречивому результату и образованию пространств под пигментным эпителием сетчатки.

В своей работе мы используем 2-6% глутаральдегид, который является хорошим фиксатором для роговицы, хрусталика и сетчатки глаза. Его использование позволяет сохранить форму глазного яблока, что важно для корректной гистологической оценки материала. Фиксация осуществляется методом инъекции.

Метод инъекции

Для введения фиксатора в глазное яблоко следует использовать иглы небольшого размера. Иглу (с присоединённым шприцом) вводят через склеру в стекловидное тело вдоль плоскости длинной задней цилиарной артерии (для не приматов) или под углом примерно 90 градусов к ней (для приматов). Точка ввода должна располагаться позади лимба роговицы в направлении к толстой части глазного яблока, чтобы не повредить хрусталик. Держа глазное яблоко одной рукой, медленно вводят фиксатор в стекловидное тело. Когда появляется ощущение, что глазное яблоко набухает, следует остановиться (примерно 0,15-0,3 мл фиксатора).

Фиксация сетчатки

Для гистологического исследования сетчатки глаза мы используем позаимствованный из гуманной медицины оптимизированный протокол подготовки человеческого глаза для получения качественных образцов сетчатки, разработанный американской лабораторией Cureline.

Техника вырезки сетчатки

Оптимизированный протокол подготовки человеческого глаза для получения качественных образцов сетчатки, разработанный американской лабораторией Cureline.

 1  — произвести разрез глазного яблока с латеральной верхней поверхности;

 2  — отпрепарировать несколько небольших фрагментов стенки глаза и уложить их на подготовительную доску внутренней поверхностью вверх;

 3, 4  — взять бумажный фильтр и сложить его в виде конуса, чтобы получился своеобразный карман;

 5  — два или более фрагмента глазной стенки сложить вместе, наподобие бутерброда;

 6  — поместить фрагменты в полученный из бумажного фильтра карман;

 7  — с помощью скрепки закрыть карман;

 8  — в течение 24 часов фиксировать образцы в 10% буферном растворе формалина с обработкой в гистологическом процессоре.

Перед помещением материала в гистологический парафин бумажный фильтр удаляют.

Поделиться: