Гистология глаз животных

Гистология глаз животных — многоэтапный и трудоёмкий процесс, включающий в себя взятие материала, его фиксацию, обезвоживание, заливку в парафин, изготовление срезов, окрашивание и, собственно, исследование полученных срезов.

В России единицы занимаются подобным исследованием, однако, несмотря на его сложность, есть ряд случаев, при которых это патоморфологическое исследование незаменимо. Например, в офтальмоонкологии гистология тканей глаза позволяет точно установить вид опухоли, степень её прорастания в окружающие ткани, наличие метастазов и полноту иссечения после хирургического вмешательства.

Бюро ветеринарной морфологии CYTOVET предлагает ветеринарным врачам, столкнувшимся в своей практике с необходимостью гистологии тканей глаз собак, кошек или других животных, свои услуги в проведении данного исследования. Мы следим за современными тенденциями развития данной методики, перенимаем опыт зарубежных коллег и гарантируем качество проведённого исследования.

Обратите внимание, что мы сделали отдельный бланк направления для офтальмологов. Ссылка на его скачивание есть на каждой странице в самом низу.

Ниже мы последовательно остановимся на некоторых этапах, чтобы наглядно показать, как проводится гистологическое исследование глаз в нашем кабинете, а также дадим несколько рекомендаций по взятию и отправке материала.

Взятие материала

Взятие материала на гистологию тканей глаза осуществляется путём энуклеации глазного яблока. Эту манипуляцию следует производить аккуратно, чтобы предотвратить отслоение сетчатки и появление всевозможных артефактов в препарате.

Удалять глазное яблоко нужно, как можно ближе к стенке орбиты, чтобы в материале присутствовал участок зрительного нерва. Это нужно для последующего получения срезов с поперечными сечениями зрительного нерва. Нужен участок длиной всего несколько миллиметров, но пренебрежение этим моментом приводит к артефактам или полной невозможности оценить состояние зрительного нерва.

Лишние ткани вокруг глазного яблока надо удалить (включая гардерову железу у грызунов). Это облегчит обзор и препарирование материала, а также предотвратит возможное отслоение сетчатки.

Мы рекомендуем сохранять фрагменты мышечных волокон, чтобы была возможность ориентироваться, где какая сторона, и отличить левое глазное яблоко от правого.

Маркировать глазные яблоки также можно с помощью татуировочных чернил, несмываемой краски, швов и другими доступными способами.

Фиксация глазного яблока

Фиксацию нужно начинать как можно раньше после энуклеации/смерти, что позволит минимизировать аутолиз. Наличие в материале внутриглазных образований, крови, а также большие глазные яблоки, например, у лошадей, требуют более длительной фиксации.

Если взятие материала производилось вне лаборатории, то следует поместить глазные яблоки в формалин и в течение 24 часов доставить на исследование.

На 1 часть объёма глазного яблока нужно 10 частей фиксатора. Использование марли позволяет произвести полную фиксацию на 360 градусов. Нет необходимости в периодических обливаниях материала, поскольку это может привести к противоречивому результату и образованию пространств под пигментным эпителием сетчатки.

В своей работе мы используем 2-6% глутаральдегид, который является хорошим фиксатором для роговицы, хрусталика и сетчатки глаза. Его использование позволяет сохранить форму глазного яблока, что важно для корректной гистологической оценки материала. Фиксация осуществляется методом инъекции.

Метод инъекции

Для введения фиксатора в глазное яблоко следует использовать иглы небольшого размера. Иглу (с присоединённым шприцом) вводят через склеру в стекловидное тело вдоль плоскости длинной задней цилиарной артерии (для не приматов) или под углом примерно 90 градусов к ней (для приматов). Точка ввода должна располагаться позади лимба роговицы в направлении к толстой части глазного яблока, чтобы не повредить хрусталик. Держа глазное яблоко одной рукой, медленно вводят фиксатор в стекловидное тело. Когда появляется ощущение, что глазное яблоко набухает, следует остановиться (примерно 0,15-0,3 мл фиксатора).

Фиксация сетчатки

Для гистологического исследования сетчатки глаза мы используем общепринятую междунородную методику кольцевой нарезки.

В качестве эксперимента пробовали использовать позаимствованный из гуманной медицины оптимизированный протокол подготовки человеческого глаза, разработанный американской лабораторией Cureline. Однако, ввиду его непрактичности (деформирует сетчатку при разрезах и вырезке), отказались от использования этой методики в пользу «классики».

Примеры гистологических исследований глазного яблока животных