Скрининговые методы современной цитологии в ветеринарии: применение жидкостной цитологии и клеточного блока в морфологии
Скрининговые методы современной цитологии, такие как жидкостная цитология и метод клеточного блока, внедрены для создания условий по стандартизации преаналитического этапа и обеспечения качества цитологического исследования в ветеринарии.
Введение
Клиническая цитология изучает клеточный состав патологических процессов. Она стала неотъемлемой частью клинического обследования животных в практике ветеринарного врача. Цитологический метод технически прост, быстр, сравнительно дешев, малотравматичен и практически безболезненен, при его использовании доступна любая локализация в организме животного.
Однако следует отметить, что успех цитологической диагностики, помимо квалификации цитолога, во многом зависит от того, каким образом был получен материал, как он был обработан, и насколько точно было составлено сопроводительное направление с описанием места локализации исследуемого патологического участка. Важны и другие моменты преаналитического этапа до поступления в цитологическую лабораторию.
Преаналитический этап – один из основных этапов, на котором происходит (зачастую неконтролируемое) снижение контроля качества в лабораторной и цитологической диагностике.
Для создания условий по стандартизации преаналитического этапа и обеспечения качества цитологического исследования внедрены современные методы получения материала, подготовки и доставки проб.
Жидкостная цитология
В последние годы, помимо рутинных (классических) цитологических мазков на стекле, для получения качественных монослойных цитологических препаратов используется жидкостная система, как один из методов снижения негативных факторов и недостатков преаналитического этапа.
Преимущества жидкостной цитологии
Применение методики жидкостной цитологии имеет ряд преимуществ:
- Стандартизирует метод изготовления цитологического мазка в условиях лаборатории.
- Способствует доставке пробы в лабораторию в оптимальных условиях.
- Обеспечивает сохранность клеточных структур. Материал можно хранить от недели до нескольких месяцев, так как в консерванте он устойчив к колебаниям температуры (НЕ ЗАМОРАЖИВАТЬ!).
- Уменьшает внешнюю загрязненность цитологического образца – фон мазка (лизис эритроцитов, фильтрация слизи и др.).
- Позволяет сделать несколько цитологических препаратов из 1 пробы. Клетки сосредотачиваются в одном поле (экономия клеточного материала), что сокращает время просмотра препарата и значительно экономит дорогостоящие сыворотки при проведении иммуноцитохимического исследования.
- Влажная фиксация препарата в консерванте, содержащем производные спиртов, сразу после взятия цитологического образца может применяться при окраске по Папаниколау (гормональный фон мазка).
- В некоторых консервирующих средах клеточный материал пригоден для дополнительных лабораторных исследований (генетически-молекулярных, ИЦХ, ЦХ и др.).
Недостатки жидкостной цитологии
К недостаткам методики жидкостной цитологии по сравнению с классической цитологией можно отнести: трудозатратность метода в случае, если он не автоматизирован; высокую дороговизну закрытых систем; необходимость в подтверждении клеточности; возможность искажений и артефактов клеток в консерванте; специальное обучение врача-морфолога.
Клинические случаи применения метода жидкостной цитологии
В нашей практике исследовано 32 гастробиоптата с применением скрининговых методик (жидкостная и классическая цитология) предварительного цитологического заключения с последующим гистологическим диагнозом. Данные методики позволяют сообщать врачу предварительные морфологические заключения и определить тактику лечебного процесса до гистологического заключения.
Клинический случай №1
Кот, 12 лет, порода: метис.
В анамнезе хроническая рвота. При гастроскопии выявлен отек слизистой с точечными петехиями слизистой.
Заключение: хронический неактивный гастрит с очаговой тонкокишечной метаплазией эпителия.
Жидкостная цитология х400, окраска по Папаниколау. Дисрегенеративная диспластическая гиперплазия.
Традиционный цитологический мазок х400 (отпечаток), окраска Паппенгейма.
Дисрегенеративная диспластическая гиперплазия.
Гистологический препарат х100 (компьютерная сшивка). В отечном биоптате в поверхностных отделах слизистой имеется слабо выраженная лимфо-плазмоцитарная и гистиоцитарная инфильтрация, очаговый фиброз и тонкокишечная метаплазия эпителия.
Клинический случай №2
Кот, 9 лет, порода: персидская.
Новообразование кожи 2×2,5 см с кистозными полостями. Под кистами выявлено уплотнение толщи кожи. Произведено пунктирование патологического участка.
Заключение: плоскоклеточный рак (возможно, аденопластический вариант). Требуется фенотипирование!
Новообразование толщи кожи с кистами.
Жидкостная цитология х400, окраска по Папаниколау. Комплексы опухолевых эпителиальных клеток с признаками умеренного полиморфизма, нарушенным рисунком хроматина ядра. Характеристики неороговевающего плоскоклеточного рака с кистозной дегенерацией.
Традиционный цитологический мазок х400 (пунктат), окраска Паппенгейма. Ядра клеток слабо полиморфные с признаками конденсирования хроматина. Большая часть клеток округлой формы, выявлены единичные клетки с полигональной формой.
Жидкостная цитологии делает возможным использовать клеточный материал в последующих исследованиях методом клеточного блока (cell-block), при котором получаются препараты, занимающие промежуточное положение между цитологическими и гистологическими методами морфологии.
Клеточный блок (cell-block)
Клеточный блок — это агрегация клеточно-тканевых фрагментов (клочков ткани) с последующими изготовлением гистологического среза и окраской, позволяющая производить морфологическую оценку.
Таким образом, метод жидкостной цитологии позволяет сохранить тонкоигольный биоптат для гистологического исследования.
Клеточные срезы интерпретируются по гистологическим критериям: фрагменты тканевых структур, архитектоника ткани, которая облегчает оценку материала по нескольким разделам гистогенеза. Как правило, данная морфологическая картина не доступна в цитологических мазках.
Методика cell-block, разработанная еще в 70-х годах, стала популярна в последние 10 лет вместе с поиском и внедрением стандартов иммунологических окрасок цитологических образцов.
В настоящее время это один из методов, позволяющий проводить иммуногистохимическое исследование цитологического образца в иммуностейнерах (стандартизированные автоматы для окраски мазков, срезов). Иммуноцито(гисто)химическое исследование нередко является решающим в дифференциальной диагностике новообразований, когда при рутинном исследовании возникают непреодолимые трудности в установлении гистогенеза отдельных опухолей, определении источника метастазирования, трактовке первично-множественных поражений.
Преимущества клеточного блока имеют дополнительную ценность при поиске щадящих методов диагностики в случаях неоперабельных или обнаруженных в терминальных стадиях злокачественных опухолей, или при взятии материала из трудно исследуемых участков, выпотах и др.
К сложностям в работе с клеточным блоком можно отнести трудозатратность методики, высокую дороговизну автоматизации и роботизации процесса, необходимость подтверждения клеточности, что требует дополнительного изготовления мазка методом жидкостной цитологии, а также возможность искажений и артефактов. Кроме того, требуется согласованная работа цитолога и гистолога.
Хотите научиться технологии cell-block под руководством наших специалистов?
Тогда приезжайте к нам учиться.
Курс «Гистология Одного Дня»
научит этому и многим другим техникам и хитростям из нашей повседневной практики.
Клинические случаи применения метода клеточного блока
Уже несколько исследований, проведенных с применением метода клеточного блока, позволили произвести щадящую диагностику и фенотипирование опухолевых процессов с последующим назначением химиотерапевтического лечения животным в разных стадиях опухолевого поражения.
Клинический случай №3
Собака, кобель, 11 лет, порода: той-пудель.
Выявлено новообразование переднего пакета молочной железы размером 3х5 см, подвижное, бугристое, безболезненное, с гиперемией участков кожи в области соска.
Лимфатический узел (2 стеклопрепарата) — материал клеточный; среди элементов крови и большого количества макрофагов одиночные клетки и солидные комплексы с выраженной атипией, нарушением ядерно-цитоплазматического соотношения, многочисленными крупными хорошо выраженными ядрышками, глыбчатым хроматином, многочисленными фигурами митозов, в том числе, патологических.
Заключение: Цитологическая картина и иммунофенотип соответствуют низкодифференцированной аденокарциноме молочной железы с высоким потенциалом злокачественности с метастазом в лимфатический узел.
Новообразование переднего пакета молочной железы размером 3х5 см.
Жидкостная цитология х400, окраска по Папаниколау. Клеточный материал представлен одиночными клетками и солидными комплексами с признаками атипии, нарушением ядерно-цитоплазматического соотношения, многочисленными крупными хорошо выраженными ядрышками, глыбчатым хроматином.
Традиционный цитологический мазок х400 (пунктат), окраска Паппенгейма. Представлен одиночными клетками, солидными и ацинарными комплексами с выраженной атипией, нарушением ядерно-цитоплазматического соотношения, многочисленными крупными хорошо выраженными ядрышками, глыбчатым хроматином, многочисленными фигурами митозов, в том числе, патологических. Фон: элементы крови, макрофаги, нейтрофильные лейкоциты, плазматические клетки.
Cell-block х100 (компьютерная сшивка), окраска гематоксилин-эозином. Одиночные клетки и солидные комплексы атипичных клеток.
Cell-block х100 (иммуногистохимия), окраска с положительной экспрессией АЕ1/АЕ3(+++). Отрицательная экспрессия Melan A, CD45, Mammaglobin, ER, PR, Chromogranin. Индекс пролиферативной активности выше ~40%.
В совокупности цитологический метод и cell-block позволяют в динамике, не травмируя пациента, изучать лечебный патоморфоз при химиолучевой и фотодинамической терапии.
Клинический случай №4
Кошка, 5 лет, порода: метис.
Округлое новообразование кожи в области правого верхнего века с участком аллопеции размер 4х4 см. После дренажирования замечено увеличение и болезненность. Произведено пунктирование патологического участка.
Заключение: Микотическая гранулема (криптококкоз — cryptococcosis).
Округлое новообразование кожи с участком аллопеции размер 4х4 см.
Жидкостная цитология х400, окраска по Папаниколау. Участок слизи с грибками, морфологически схожими с криптококками.
Традиционный цитологический мазок х400 (пунктат), окраска Паппенгейма. Микотические колонии, морфологически схожие с криптококками.
Cell-block х100 (компьютерная сшивка), окраска гематоксилин-эозином. Множественные клетки воспаления и внутрицитоплазматические включения грибковых тел в нейтрофилах и макрофагах.
Выводы
Наш опыт показывает, что использование методов жидкостной цитологии, проведения дополнительных цитологических окрасок (по Папаниколау), изготовления клеточных блоков (cell-block) и иммуноцито(гисто)химической диагностики, как правило, позволяет:
- частично стандартизировать цитологический метод,
- снизить ошибки преаналитического этапа,
- выявить достаточные признаки для постановки более определенного, достоверного заключения.
Автор статьи: Литвинов Николай Валерьевич, КВН, научный сотрудник Лаборатории молекулярной медицины ГБОУ ВПО СПбГМУ им. И.П. Павлова Минздравсоцразвития России, член ESVCP, эксперт-консультант Органа по сертификации качества Российской Метрологической Академии в системе Ростехрегулирования РФ, научный руководитель коллегиальной экспертизы «CYTOVET», эксперт ООО КФ «Микроскоп Плюс» г. Санкт-Петербург.