Применение гемолитического фиксатора CYTORICH Red Preservative Fluid в цитологии
Данный материал представляет собой инструкцию по применению гемолитического фиксатора CYTORICH® Red Preservative Fluid в цитологии. Специалисты CYTOVET используют этот раствор при проведении цитологических исследований методом жидкостной цитологии.
Оригинал инструкции — https://cytovet.ru/download/cytorich_red_pi.pdf
Раствор CYTORICH® Red Preservative Fluid — это гемолитический фиксатор. Предназначается для цитологии и обработки биопсийных материалов небольшого размера. Упакован в герметичные пластиковые контейнеры. В его состав входят следующие активные вещества: спирты, формальдегид, неядовитые уменьшающие раздражение средства, смягчающие средства, а также буферные вещества.
Назначение
- Раствор CYTORICH® Red Preservative Fluid предназначен для консервации клеток и небольших фрагментов ткани в суспензии.
- Он используется для подготовки клеток и небольших фрагментов тканей для цитологического и гистологического исследования.
- CYTORICH® Red Preservative Fluid растворяет эритроциты и повышает растворимость белков.
- Законсервированные образцы могут быть подвергнуты иммуногистохимическому окрашиванию, а его результаты аналогичны результатам, полученным при использовании нейтрального буферного формалина.
Краткие сведения и объяснение
- CYTORICH® Red Preservative Fluid не продается как фиксатор для шеечно-влагалищных цитологических обследований.
- CYTORICH® Red Preservative Fluid используется для диагностической не шеечно-влагалищной цитологии. В данном случае он является фиксатором для клеток и небольших образцов тканей тела человека, включая, среди прочего, мокроту, смывы, ткани, полученные при щеточной биопсии, соскобы, жидкости организма, экссудаты, а также тонкоигольные пунктаты.
- Клетки и небольшие фрагменты тканей, зафиксированные в растворе CYTORICH® Red Preservative Fluid, можно обрабатывать с помощью устройства для обработки препаратов PREPSTAIN®, цитоцентрифугирования или методом клеточного блока.
Механизмы гемолиза и фиксации
CYTORICH® Red Preservative Fluid растворяет эритроциты, сшивает растворимые глобулиновые белки, а спирт фиксирует клетки и небольшие фрагменты тканей. Один миллилитр раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid может растворить эритроциты и стабилизировать растворимые белки 25 – 50 микролитров цельной крови.
- Мембраны эритроцитов селективно эмульгируются, а затем разрушаются под действием спирта в сочетании с осмотическим лизисом. Лизис эритроцитов некоторых людей с гемоглобинопатией может протекать медленно или эритроциты могут быть устойчивыми к полному лизису. Стареющие эритроциты устойчивы к лизису.
- Глобулины, высвобождаемые из эритроцитов, и собранные с плазмой крови и жидкостями промежуточных тканей, сшиваются формальдегидом, содержащимся в растворе, прежде чем они разрушаются под действием спиртов; тем самым предотвращается образование крупных белковых агрегатов (хлопьевидные осадки).
- Другие клеточные мембраны действуют как селективные барьеры, позволяя спиртам проникать в цитоплазму и нуклеоплазму клетки намного быстрее, чем формальдегиду. При этом клетки выглядят так, как если бы они были зафиксированы спиртом.
- Впоследствии межклеточные соединения и внутриклеточные белки фиксируются сшивкой под действием формальдегида, который обуславливает устойчивость клеток и фрагментов тканей в суспензии в течение длительного времени.
Требования к условиям хранения и транспортировки проб
- Раствор CYTORICH® Red Preservative Fluid следует хранить при комнатной температуре (15 – 30 °C).
- Срок годности — два года с даты выпуска.
- Пробы, зафиксированные в растворе CYTORICH® Red Preservative Fluid, устойчивы не менее 30 дней.
- Морфологическая устойчивость наблюдалась у образцов, хранившихся при комнатной температуре до шести месяцев.
- Пробы, зафиксированные в растворе CYTORICH® Red Preservative Fluid, выдерживают транспортировку в диапазоне температур примерно от -5 до +45 °C.
Общие меры предосторожности
- Не набирайте жидкость в пипетку ртом.
- Не допускайте попадания реагентов на открытые раны.
- Используйте перчатки без присыпки, лабораторный халат и средство для защиты глаз во время проведения лабораторных процедур.
- Принимайте соответствующие меры предосторожности биологической безопасности при работе с пробами клеток и тканей.
- Не для приема внутрь (содержит спирты, отличные от этанола, а также формальдегид).
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Цитологические пробы могут содержать возбудителей инфекций. Работайте в перчатках и принимайте соответствующие меры предосторожности биологической безопасности при обработке образцов.
Общая подготовка проб
Общие сведения
Один миллилитр раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid может растворить и стабилизировать 25 – 50 микролитров цельной крови. Исходя из этого, одну каплю (50 микролитров) водной клеточной суспензии можно очистить от эритроцитов и белков и зафиксировать одним миллилитром раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid.
Метод
- Отбирают клетки в их естественной жидкости, в сбалансированном солевом растворе или в физиологическом растворе. Жидкости могут быть антикогаулированными (например гепаринизированными) во избежание образования сгустков фибрина.
- Концентрируют клеточную суспензию с помощью обычного центрифугирования (600-кратная сила тяжести в течение 5 минут).
- Декантируют и надлежащим образом утилизируют надосадочную жидкость.
- Встряхивают сгусток клеток для образования однородной клеточной суспензии с 50 % содержанием клеток (50 % содержание клеток = 50 % об./об. клеток + надосадочная жидкость).
- Помещают около 5 – 10 капель клеточной суспензии в 10 миллилитров раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid и перемешивают до образования однородной клеточной суспензии.
- Теперь образец сохранит устойчивость до нескольких недель. Перед дальнейшей обработкой следует дать образцу отстояться не менее 30 минут.
- Обрабатывают образец.
• С помощью устройства для обработки препаратов PREPSTAIN® (см. руководство оператора PREPSTAIN®).
• С помощью желтого раствора CYTORICH® и цитоцентрифугирования (см. вкладыш в упаковке желтого раствора CYTORICH®).
• Методом клеточного блока.
Рекомендованные протоколы подготовки проб
Жидкости полости тела
- Концентрируют антикоагулированный образец с помощью обычного центрифугирования (600-кратная сила тяжести в течение 5 минут).
- Декантируют и надлежащим образом утилизируют надосадочную жидкость.
- Встряхивают сгусток клеток для образования однородной суспензии клеток с 50 % критической массы клеток.
- Переносят около 5 – 10 капель раствора клеток в 10 миллилитров раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid и перемешивают до образования однородной клеточной суспензии. Очень гипоклеточные образцы, такие как цереброспинальные жидкости, можно фиксировать всего в 1 миллилитре раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid.
- Теперь образец сохранит устойчивость до нескольких недель. Перед дальнейшей обработкой следует дать образцу отстояться не менее 30 минут.
Смывы, ткани, полученные при щёточной биопсии и соскобы
- Собирают смывы клеток в антикоагулированный водный солевой раствор. Если щетку или другое абразивное устройство необходимо использовать несколько раз, его можно периодически промывать в антикоагулированном водном солевом растворе.
- Концентрируют образец с помощью обычного центрифугирования (600-кратная сила тяжести в течение 5 минут).
- Декантируют и надлежащим образом утилизируют надосадочную жидкость.
- Встряхивают сгусток клеток для образования однородной суспензии клеток с 50 % критической массы клеток.
- Переносят около 5 – 10 капель раствора клеток в 10 миллилитров раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid и перемешивают до образования однородной клеточной суспензии.
- Теперь образец сохранит устойчивость до нескольких недель. Перед дальнейшей обработкой следует дать образцу отстояться не менее 30 минут.
- Если щетку или другое абразивное устройство будет использоваться только один раз (т. е. не будет повторно введено в пациента после взятия пробы), ее можно сразу поместить в соответствующее количество раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid.
- В качестве альтернативы пункту 7 можно промыть щетку в растворе CYTORICH® Red Preservative Fluid, а затем промыть ее в стерильном солевом растворе перед повторным введением в пациента.
- Для эндометриальных щеток, эндоцервикальных щеток и деревянных шпателей требуется около 10 – 15 миллилитров консервирующего раствора.
- Клетки быстро удаляются со щеток и деревянных палочек путем энергичного встряхивания или вихревого перемешивания.
- Перед дальнейшей обработкой образцу следует дать зафиксироваться в течение не менее 30 минут. Образец сохранит устойчивость до нескольких недель.
- Для обработки образца, перемешанного с устройствами для взятия пробы, закрывают отверстие первоначального сосуда для взятия пробы тонкой сеткой (как фата) и переливают жидкий образец в коническую пробирку.
Тонкоигольная пункционная биопсия
Метод 1 (предметные стёкла не подготавливаются на месте)
- Предварительно заполняют шприц 2 миллилитрами антикоагуляционного солевого раствора.
- Предварительно заполняют пробирку или другой закрытый контейнер 10 миллилитрами раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid.
- Выполняют пункционную биопсию, взяв образец клеток на кончике иглы.
- Выпускают содержимое иглы и шприца в раствор CYTORICH® Red Preservative Fluid.
- Видимые небольшие фрагменты и замутнение консервирующего раствора обычно (> 95 % случаев) характерны для образцов, соответствующих требованиям.
- Перед дальнейшей обработкой образцу следует дать зафиксироваться в течение не менее 30 минут. Образец сохранит устойчивость до нескольких недель.
- Для обработки образца, смешанного с фрагментами тканей, следует зафиксировать фрагменты тканей в формалине и обработать методом клеточного блока.
Метод 2 (предметные стёкла подготавливаются на месте)
- Предварительно заполняют шприц 2 миллилитрами воздуха. Гепаринизация шприца с иглой необязательна, но рекомендуется ее выполнять.
- Выполняют пункционную биопсию, взяв образец клеток на кончике иглы.
- Выпускают содержимое иглы на предметное стекло (стекла) и готовят препарат методом воздушной сушки или фиксированного мазка.
- Промывают иглу и шприц 5 – 10 миллилитрами раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid, чтобы очистить шприц и иглу.
- Перед дальнейшей обработкой образцу следует дать зафиксироваться в течение не менее 30 минут. Смыв со шприца с иглой сохранит устойчивость до нескольких недель.
- Для обработки образца, перемешанного с фрагментами тканей, закрывают отверстие первоначального сосуда для взятия пробы тонкой сеткой (как фата) и переливают жидкий образец в коническую пробирку. Затем фиксируют фрагменты тканей формалином и обрабатывают методом клеточного блока.
Мокрота
В отличие от раствора Саккомано, раствор CYTORICH® Red Preservative Fluid не вызывает отвердения слизи. Он не является строго муколитическим раствором, хотя уменьшающие раздражение и смягчающие средства увлажняют и смягчают мокроту. Клетки можно отделить от смягченной жидкой слизи путем энергичного перемешивания. Затвердевшие носовые выделения, сгустки слизи и небольшие фрагменты тканей могут быть выделены из жидкого образца и исследованы гистологически методом клеточного блока.- Смешивают один объем мокроты примерно с 5 объемами раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid (обычно с 25 миллилитрами) в закрытом контейнере для проб (например, в сосуде для проб вместимостью 150 миллилитров).
- Опускают якорь магнитной мешалки в смесь.
- Энергично перемешивают с помощью магнитной мешалки в течение 15 – 30 минут.
- В шкафу для работы с биологически опасными образцами снимают крышку с контейнера, закрывают отверстие контейнера тонкой сеткой и фильтруют жидкую часть пробы в коническую пробирку.
- Перед дальнейшей обработкой образцу следует дать зафиксироваться в течение не менее 30 минут. Образец сохранит устойчивость до нескольких недель.
- Затвердевшие носовые выделения, сгустки слизи и небольшие фрагменты тканей можно выделить из жидкого образца, затем зафиксировать формалином и исследовать гистологически методом клеточного блока.
Ограничения процедуры
- После получения цитологические образцы необходимо зафиксировать с помощью раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid как можно скорее.
- Образец, разложившийся до фиксации, не пригоден для исследования.
- Не следует использовать раствор CYTORICH® Red Preservative Fluid для фиксации фрагментов ткани со средним диаметром больше 5 миллиметров.