Применение гемолитического фиксатора CYTORICH Red Preservative Fluid в цитологии

CYTORICH Red Preservative Fluid

Данный материал представляет собой инструкцию по применению гемолитического фиксатора CYTORICH® Red Preservative Fluid в цитологии. Специалисты CYTOVET используют этот раствор при проведении цитологических исследований методом жидкостной цитологии.

Оригинал инструкции — http://cytovet.ru/download/cytorich_red_pi.pdf

Раствор CYTORICH® Red Preservative Fluid — это гемолитический фиксатор. Предназначается для цитологии и обработки биопсийных материалов небольшого размера. Упакован в герметичные пластиковые контейнеры. В его состав входят следующие активные вещества: спирты, формальдегид, неядовитые уменьшающие раздражение средства, смягчающие средства, а также буферные вещества.

Назначение

  1. Раствор CYTORICH® Red Preservative Fluid предназначен для консервации клеток и небольших фрагментов ткани в суспензии.
  2. Он используется для подготовки клеток и небольших фрагментов тканей для цитологического и гистологического исследования.
  3. CYTORICH® Red Preservative Fluid растворяет эритроциты и повышает растворимость белков.
  4. Законсервированные образцы могут быть подвергнуты иммуногистохимическому окрашиванию, а его результаты аналогичны результатам, полученным при использовании нейтрального буферного формалина.

Краткие сведения и объяснение

  1. CYTORICH® Red Preservative Fluid не продается как фиксатор для шеечно-влагалищных цитологических обследований.
  2. CYTORICH® Red Preservative Fluid используется для диагностической не шеечно-влагалищной цитологии. В данном случае он является фиксатором для клеток и небольших образцов тканей тела человека, включая, среди прочего, мокроту, смывы, ткани, полученные при щеточной биопсии, соскобы, жидкости организма, экссудаты, а также тонкоигольные пунктаты.
  3. Клетки и небольшие фрагменты тканей, зафиксированные в растворе CYTORICH® Red Preservative Fluid, можно обрабатывать с помощью устройства для обработки препаратов PREPSTAIN®, цитоцентрифугирования или методом клеточного блока.

Механизмы гемолиза и фиксации

CYTORICH® Red Preservative Fluid растворяет эритроциты, сшивает растворимые глобулиновые белки, а спирт фиксирует клетки и небольшие фрагменты тканей. Один миллилитр раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid может растворить эритроциты и стабилизировать растворимые белки 25 – 50 микролитров цельной крови.

  1. Мембраны эритроцитов селективно эмульгируются, а затем разрушаются под действием спирта в сочетании с осмотическим лизисом. Лизис эритроцитов некоторых людей с гемоглобинопатией может протекать медленно или эритроциты могут быть устойчивыми к полному лизису. Стареющие эритроциты устойчивы к лизису.
  2. Глобулины, высвобождаемые из эритроцитов, и собранные с плазмой крови и жидкостями промежуточных тканей, сшиваются формальдегидом, содержащимся в растворе, прежде чем они разрушаются под действием спиртов; тем самым предотвращается образование крупных белковых агрегатов (хлопьевидные осадки).
  3. Другие клеточные мембраны действуют как селективные барьеры, позволяя спиртам проникать в цитоплазму и нуклеоплазму клетки намного быстрее, чем формальдегиду. При этом клетки выглядят так, как если бы они были зафиксированы спиртом.
  4. Впоследствии межклеточные соединения и внутриклеточные белки фиксируются сшивкой под действием формальдегида, который обуславливает устойчивость клеток и фрагментов тканей в суспензии в течение длительного времени.

Требования к условиям хранения и транспортировки проб

  1. Раствор CYTORICH® Red Preservative Fluid следует хранить при комнатной температуре (15 – 30 °C).
  2. Срок годности — два года с даты выпуска.
  3. Пробы, зафиксированные в растворе CYTORICH® Red Preservative Fluid, устойчивы не менее 30 дней.
  4. Морфологическая устойчивость наблюдалась у образцов, хранившихся при комнатной температуре до шести месяцев.
  5. Пробы, зафиксированные в растворе CYTORICH® Red Preservative Fluid, выдерживают транспортировку в диапазоне температур примерно от -5 до +45 °C.

Общие меры предосторожности

  1. Не набирайте жидкость в пипетку ртом.
  2. Не допускайте попадания реагентов на открытые раны.
  3. Используйте перчатки без присыпки, лабораторный халат и средство для защиты глаз во время проведения лабораторных процедур.
  4. Принимайте соответствующие меры предосторожности биологической безопасности при работе с пробами клеток и тканей.
  5. Не для приема внутрь (содержит спирты, отличные от этанола, а также формальдегид).

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ. Цитологические пробы могут содержать возбудителей инфекций. Работайте в перчатках и принимайте соответствующие меры предосторожности биологической безопасности при обработке образцов.

Общая подготовка проб

Общие сведения

Один миллилитр раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid может растворить и стабилизировать 25 – 50 микролитров цельной крови. Исходя из этого, одну каплю (50 микролитров) водной клеточной суспензии можно очистить от эритроцитов и белков и зафиксировать одним миллилитром раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid.

Метод

  1. Отбирают клетки в их естественной жидкости, в сбалансированном солевом растворе или в физиологическом растворе. Жидкости могут быть антикогаулированными (например гепаринизированными) во избежание образования сгустков фибрина.
  2. Концентрируют клеточную суспензию с помощью обычного центрифугирования (600-кратная сила тяжести в течение 5 минут).
  3. Декантируют и надлежащим образом утилизируют надосадочную жидкость.
  4. Встряхивают сгусток клеток для образования однородной клеточной суспензии с 50 % содержанием клеток (50 % содержание клеток = 50 % об./об. клеток + надосадочная жидкость).
  5. Помещают около 5 – 10 капель клеточной суспензии в 10 миллилитров раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid и перемешивают до образования однородной клеточной суспензии.
  6. Теперь образец сохранит устойчивость до нескольких недель. Перед дальнейшей обработкой следует дать образцу отстояться не менее 30 минут.
  7. Обрабатывают образец.
    • С помощью устройства для обработки препаратов PREPSTAIN® (см. руководство оператора PREPSTAIN®).
    • С помощью желтого раствора CYTORICH® и цитоцентрифугирования (см. вкладыш в упаковке желтого раствора CYTORICH®).
    • Методом клеточного блока.

Рекомендованные протоколы подготовки проб

Жидкости полости тела

  1. Концентрируют антикоагулированный образец с помощью обычного центрифугирования (600-кратная сила тяжести в течение 5 минут).
  2. Декантируют и надлежащим образом утилизируют надосадочную жидкость.
  3. Встряхивают сгусток клеток для образования однородной суспензии клеток с 50 % критической массы клеток.
  4. Переносят около 5 – 10 капель раствора клеток в 10 миллилитров раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid и перемешивают до образования однородной клеточной суспензии. Очень гипоклеточные образцы, такие как цереброспинальные жидкости, можно фиксировать всего в 1 миллилитре раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid.
  5. Теперь образец сохранит устойчивость до нескольких недель. Перед дальнейшей обработкой следует дать образцу отстояться не менее 30 минут.

Смывы, ткани, полученные при щёточной биопсии и соскобы

  1. Собирают смывы клеток в антикоагулированный водный солевой раствор. Если щетку или другое абразивное устройство необходимо использовать несколько раз, его можно периодически промывать в антикоагулированном водном солевом растворе.
  2. Концентрируют образец с помощью обычного центрифугирования (600-кратная сила тяжести в течение 5 минут).
  3. Декантируют и надлежащим образом утилизируют надосадочную жидкость.
  4. Встряхивают сгусток клеток для образования однородной суспензии клеток с 50 % критической массы клеток.
  5. Переносят около 5 – 10 капель раствора клеток в 10 миллилитров раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid и перемешивают до образования однородной клеточной суспензии.
  6. Теперь образец сохранит устойчивость до нескольких недель. Перед дальнейшей обработкой следует дать образцу отстояться не менее 30 минут.
  7. Если щетку или другое абразивное устройство будет использоваться только один раз (т. е. не будет повторно введено в пациента после взятия пробы), ее можно сразу поместить в соответствующее количество раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid.
  8. В качестве альтернативы пункту 7 можно промыть щетку в растворе CYTORICH® Red Preservative Fluid, а затем промыть ее в стерильном солевом растворе перед повторным введением в пациента.
  9. Для эндометриальных щеток, эндоцервикальных щеток и деревянных шпателей требуется около 10 – 15 миллилитров консервирующего раствора.
  10. Клетки быстро удаляются со щеток и деревянных палочек путем энергичного встряхивания или вихревого перемешивания.
  11. Перед дальнейшей обработкой образцу следует дать зафиксироваться в течение не менее 30 минут. Образец сохранит устойчивость до нескольких недель.
  12. Для обработки образца, перемешанного с устройствами для взятия пробы, закрывают отверстие первоначального сосуда для взятия пробы тонкой сеткой (как фата) и переливают жидкий образец в коническую пробирку.

Тонкоигольная пункционная биопсия

Метод 1 (предметные стёкла не подготавливаются на месте)

  1. Предварительно заполняют шприц 2 миллилитрами антикоагуляционного солевого раствора.
  2. Предварительно заполняют пробирку или другой закрытый контейнер 10 миллилитрами раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid.
  3. Выполняют пункционную биопсию, взяв образец клеток на кончике иглы.
  4. Выпускают содержимое иглы и шприца в раствор CYTORICH® Red Preservative Fluid.
  5. Видимые небольшие фрагменты и замутнение консервирующего раствора обычно (> 95 % случаев) характерны для образцов, соответствующих требованиям.
  6. Перед дальнейшей обработкой образцу следует дать зафиксироваться в течение не менее 30 минут. Образец сохранит устойчивость до нескольких недель.
  7. Для обработки образца, смешанного с фрагментами тканей, следует зафиксировать фрагменты тканей в формалине и обработать методом клеточного блока.

Метод 2 (предметные стёкла подготавливаются на месте)

  1. Предварительно заполняют шприц 2 миллилитрами воздуха. Гепаринизация шприца с иглой необязательна, но рекомендуется ее выполнять.
  2. Выполняют пункционную биопсию, взяв образец клеток на кончике иглы.
  3. Выпускают содержимое иглы на предметное стекло (стекла) и готовят препарат методом воздушной сушки или фиксированного мазка.
  4. Промывают иглу и шприц 5 – 10 миллилитрами раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid, чтобы очистить шприц и иглу.
  5. Перед дальнейшей обработкой образцу следует дать зафиксироваться в течение не менее 30 минут. Смыв со шприца с иглой сохранит устойчивость до нескольких недель.
  6. Для обработки образца, перемешанного с фрагментами тканей, закрывают отверстие первоначального сосуда для взятия пробы тонкой сеткой (как фата) и переливают жидкий образец в коническую пробирку. Затем фиксируют фрагменты тканей формалином и обрабатывают методом клеточного блока.

Мокрота

В отличие от раствора Саккомано, раствор CYTORICH® Red Preservative Fluid не вызывает отвердения слизи. Он не является строго муколитическим раствором, хотя уменьшающие раздражение и смягчающие средства увлажняют и смягчают мокроту. Клетки можно отделить от смягченной жидкой слизи путем энергичного перемешивания. Затвердевшие носовые выделения, сгустки слизи и небольшие фрагменты тканей могут быть выделены из жидкого образца и исследованы гистологически методом клеточного блока.

  1. Смешивают один объем мокроты примерно с 5 объемами раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid (обычно с 25 миллилитрами) в закрытом контейнере для проб (например, в сосуде для проб вместимостью 150 миллилитров).
  2. Опускают якорь магнитной мешалки в смесь.
  3. Энергично перемешивают с помощью магнитной мешалки в течение 15 – 30 минут.
  4. В шкафу для работы с биологически опасными образцами снимают крышку с контейнера, закрывают отверстие контейнера тонкой сеткой и фильтруют жидкую часть пробы в коническую пробирку.
  5. Перед дальнейшей обработкой образцу следует дать зафиксироваться в течение не менее 30 минут. Образец сохранит устойчивость до нескольких недель.
  6. Затвердевшие носовые выделения, сгустки слизи и небольшие фрагменты тканей можно выделить из жидкого образца, затем зафиксировать формалином и исследовать гистологически методом клеточного блока.

Ограничения процедуры

  1. После получения цитологические образцы необходимо зафиксировать с помощью раствора CYTORICH® Red Preservative Fluid как можно скорее.
  2. Образец, разложившийся до фиксации, не пригоден для исследования.
  3. Не следует использовать раствор CYTORICH® Red Preservative Fluid для фиксации фрагментов ткани со средним диаметром больше 5 миллиметров.
Поделиться: 

Комментарии

Чтобы иметь возможность оставлять комментарии, вы должны войти.